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· 抗磷酸化多肽抗体的制备
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制备
· 蛋白及抗体纯化
· 抗体鉴定及标记
技术服务 >>> 抗磷酸化多肽抗体的制备
 

服务简介
    在不能获得目的蛋白为抗原时,合成其某些多肽片段为半抗原,偶联载体蛋白后,免疫动物,可获得含有针对多肽的抗体的抗血清。如此诱发的抗体有可能识别目的蛋白。蛋白磷酸化在细胞信号传递过程有十分重要的位置,合成相应的磷酸化多肽为半抗原,如上同样有可能获得能识别磷酸化目的蛋白的抗体,这为研究细胞信号传递提供了有效的手段。
    本服务针对客户所要求的磷酸化/非磷酸化多肽抗原,免疫兔或小鼠,制备针对磷酸化/非磷酸化多肽抗原的特异性多克隆抗体或单克隆抗体。

服务内容
    1. 合成多肽:按客户提供的多肽/磷酸化多肽的序列,合成多肽/磷酸化多肽。在制备抗磷酸化多肽抗体时,除了合成磷酸化多肽,还需合成相应的非磷酸化多肽,用于纯化针对磷酸化多肽的特异性抗体,二者的差别仅为其中某些氨基酸位点的磷酸化与非磷酸化。
    2. 磷酸化多肽偶联:将合成的多肽/磷酸化多肽与载体蛋白(如BSA)偶联成半抗原-载体,用于免疫动物。
    3. 免疫:以半抗原-载体多次免疫新西兰大白兔或Balb/c小鼠,获得抗血清。用ELISA测定抗血清效价,并阐明抗血清中含有针对多肽/磷酸化多肽的抗体(出示实验报告)。
    4. 客户鉴定抗血清:取部分抗血清及ELISA数据报告交由客户,根据抗血清针对目的多肽的效价及客户实验结果,由客户决定是否进行抗体特异性纯化等后续实验。
    5. 特异性纯化:在第4项肯定结果的基础上,以固相吸收的方法,去除抗多肽抗血清中针对载体蛋白的抗体,还需用类似方法,去除其中与相应非磷酸化多肽有交叉反应的抗体,最后用盐析等方法去除抗血清中非抗体蛋白。所得抗体经ELISA检测效价(同时检测抗体针对磷酸化目的多肽、非磷酸化多肽和BSA的识别性),检测合格后交由客户。
    6. 非磷酸化抗体制备流程同磷酸化抗体制备。
    7. 磷酸化/非磷酸化单克隆抗体的制备按照常规单抗制备流程进行。

服务时间
    制备针对磷酸化多肽抗原的特异性单克隆抗体分为两个阶段:
    免疫小鼠:三个月
    制备针对磷酸化/多肽抗原的特异性抗体:四个月
    制备针对磷酸化肽抗原的特异性多克隆抗体分为两个阶段:
    制备针对磷酸化/非磷酸化多肽抗原的抗血清:三个月
    针对磷酸化多肽的特异性抗体的纯化:一个半月

客户需提供材料
    客户需提供磷酸化/非磷酸化多肽抗原的氨基酸序列及磷酸化/非磷酸化位点。

提供成果
    1. 抗体:
    多抗:纯化的特异性抗磷酸化目的多肽多克隆抗体,纯度大于90%。
    单抗:分泌特异性抗磷酸化目的多肽单克隆抗体的细胞株1-2株,少量腹水。
    少量免疫前正常兔血清或鼠血清。
    目的多肽免疫后,少量兔或小鼠抗血清。
    2. 实验报告:
    多肽合成报告
    多抗或单抗制备及评价报告(包括获得抗体的浓度、纯度、体积、针对目的多肽的效价、和相应非磷酸化多肽及载体蛋白的交叉反应等技术指标)

验收标准
    ELISA检测结果显示得到的抗体针对磷酸化(非磷酸化)目的多肽有特异性反应,与相应的非磷酸化(磷酸化)多肽及免疫用载体蛋白没有交叉反应。如果客户要求进行Western blot检测验收,则需另行提出,收费(500元人民币)另计。

服务收费
    分步收费,具体信息请和本公司销售人员联系。

 
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