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单克隆抗体在临床诊断上的应用

单抗具有特异性高、纯度高、效价高、重复性好、无交叉反应及无限量生产的优点，提高了实验方法的特异性、灵敏性、准确性(标准化)。使疾病的诊断更加准确，快速、简便。用单克隆抗体构建的检测方法及检测范围如下：

1．酶联免疫吸附试验：包括直接法、间接法、免疫捕获法、竞争法等，基本原理是用抗原或抗体包被聚苯乙烯微孔板，与标本中的抗体或抗原反应后加入酶标抗体及底物显色。该技术广泛用于各类病原体的检测。

2．荧光免疫试验：包括直接免疫荧光试验及间接免疫荧光试验。其原理是以荧光素标记的抗体与抗原的反应。用于检测各类病原体。可用酶联免疫吸附试验及免疫荧光法检测的病原体有甲、乙、丙、丁、戊、庚肝病毒、单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒、HIV、风疹病毒、流感病毒、人乳头瘤病毒、出血热病毒、柯萨奇病毒等；淋球菌、伤寒沙门菌、志贺菌、钩端螺旋体、结核、痢疾杆菌等；弓形虫、丝虫、隐孢子虫、血吸虫、旋毛虫、疟原虫、囊虫、鞭毛虫等；还可以进行支原体及衣原体的检测、流行病学分型及抗原结构分型。单抗所具有的灵敏度高、特异性好的特点，使其在鉴别菌种的型及亚型、病毒变异株以及寄生虫不同生活周期的抗原性等方面具独特优势。

3．凝集实验：如ABO血型鉴定。抗A及抗B单克隆抗体与红细胞表面凝集原反应，出现肉眼可见的凝集。

4．免疫印迹分析：利用聚丙酰胺凝胶电泳的分子筛效应将不同分子量大小的蛋白质区分开来，再用针对不同蛋白质的单克隆抗体进行特异性染色以检测目的成分。

5．胶体金测定：如便潜血、人绒毛膜促性腺激素的检测等。将金标单克隆抗体平铺在试纸膜上，样品加人后，如果标本中含有人血红蛋白或HCG，则与金标单克隆抗体反应，随后被固定在检测线上的单克隆抗体富集，出现紫红色线。结果为阳性。以单抗作潜血检测试剂从而避免了动物源性血红蛋白及铁剂等物质的干扰 J。

6．放射免疫分析：对于激素、药物等小分子抗原单克隆抗体的研制成功，使得它们的检测得以常规化。 I标记的单克隆抗体与抗原物质反应，测定放射性的强度，与抗原物质的浓度相关。最低检测限为10 一10一g。可以对原来难以测定的激素进行定量分析。还可检测诸多酶类、维生素、药物和其他生化物质，这对受检者健康状态的判断、疾病的检出、指导诊断和临床治疗均具有实际意义。放射免疫测定已被广泛采用来测定转铁蛋白、肾素、甲状腺素(r4)、三碘甲状腺素(13)、干扰素、补体成分C3，cAMP、cGMP、生长素、绒毛膜促性腺激素(HCG)、促性腺激素(FSH)、促黄体生长激素(LH)、促甲状腺素(TSH)、副甲状腺素、醛固酮、雌三醇、催产素、胰岛素、IgG、IgE、地高辛、氨茶碱、苯妥英钠、苯巴比妥、氨基糖甙类抗生素、维生素B12等。用单抗取代传统的多抗，使敏感度、精确度和重复性都大为提高。

7．电化学发光检测：生物素化的单克隆抗体(针对抗原)与标本孵育后加人钌标记的单克隆抗体(针对抗原的另一靶位)和链霉亲和素包被的磁性颗粒，形成抗原．生物素化单抗一钌标记的二抗一链霉亲和素磁性颗粒复合物后被磁性电极吸附到表面，加电压后发光，发光仪检测到发光的信号。强弱与复合物的含量相关，从而达到定量检测的目的。可以检测放射免疫测定所能检测的所有物质，最低检测限为rig／ml的水平。

8．流式细胞术：随着单克隆抗体的发展，以及流式细胞仪检测方法的不断完善，采用流式细胞术不但可以对细胞的抗原和受体进行分析，还可以对细胞内的抗原或分子进行检测。其原理是荧光素标记的单克隆抗体与抗原相结合，通过流式细胞仪测定结合单抗的荧光强度，根据荧光通道数的高低判断抗原的阳性或阴性，如检测HLA．27用于诊断强直性脊柱炎(AS)、检测GPIIb／IIIa用于诊断血小板无力症(GT)等，对多种疾病的诊断具有参考意义。细胞表型分析(如CD4、CD8等)对白血病患者的疾病分期、治疗效果、预后判__断等方面有指导作用。人类白细胞分化抗原工作组(Human Leucocyte Diferentiation Antigen Workshop)在第八届工作会议上公布了274种CD，它们的检测可以通过相应抗原的单克隆抗体检测或基因检测得到。对CD的分析有助于了解细胞的分化和T细胞亚型的数量和质量变化。组织相容性抗原检测是移植免疫学的重要部分，主要组织相容性复合体(MHC)基因座编码一组高度多型的细胞表面蛋白，后者在针对蛋白质抗原的免疫应答中发挥广泛作用。MHC分子通过结合和向T细胞表达的抗原特异性受体(TCR)提呈小抗原蛋白片段来发挥功能。应用单抗对其进行位点检测可得到更可信的结果。

摘自 中华检验医学杂志